Protocolo de Amostragem de Plantas
Exemplo: soja
Macro Processo
Este material tem como objetivo orientar as partes envolvidas sobre o processo de coleta de material para envio de amostras a Agromarkers.
Amostragem
As plantas em campo devem ser identificadas por parcela com etiquetas resistentes as diversas condições ambientais. Recomenda-se usar cores diferentes para cada Biotecnologia.
Cada etiqueta pode conter as seguintes informações: Row/Column, GID e um QR Code associado ao GID, ou quaisquer outros dados que assegurem a correta identificação das plantas de forma única e inequívoca.
Após essa etapa, será necessário realizar a solicitação dos layouts ao laboratório através do email contato@agromarkers.com.br, enviando a planilha de planejamento onde contém os projetos que serão criados.
O prazo de retorno do layout (também chamado de template) é de 02 dias úteis.
Após o recebimento dos layouts dos projetos, deve-se iniciar as preparações das placas, que incluem a adição dos layouts e a fixação das etiquetas plásticas BOP nas placas.
Na figura abaixo, apresentamos um exemplo de layout (ou template como prefeir) recebido do laboratório:
A figura abaixo demonstra um modelo de etiqueta fixada em uma placa de 96 poços e exemplifica o procedimento adequado para a identificação correta das placas. Caso você tenha outro modelo basta entrar em contato com a equipe do laboratório para alinhar se o modelo de etiqueta você usa poderá ser usado.
Antes de iniciar a coleta, deve-se limpar os equipamentos que serão utilizados na amostragem (amostrador) com álcool 70%. De posse das ferramentas de amostragem pode iniciar a fase da coleta dos discos foliares, perfurando com os amostradores 8 folhas do terço superior das plantas aleatórias.
Amostra-se 90 poços foliares/material, 6 poços serão controle.
Abaixo as ferramentas que podem ser utilizadas:
Cuidados gerais
A coleta dos discos deve ocorrer em tecidos jovens e sadios, evitando as nervuras centrais, tecidos muito rígidos e com injúrias.
Para amostragem de plantas individuais borrifar álcool 70% nos amostradores a cada troca de planta e para bulk a cada troca de material.
A amostragem de uma placa não pode ser interrompida por longos períodos. Dessa forma, se uma placa começou a ser amostrada, ela deve ser rapidamente finalizada.
Após finalizada a amostragem de cada placa, recomenda-se tampá-la e mantê-la resfriada em caixa térmica com gelo. As amostras de tecido foliar fresco podem degradar-se rapidamente após a amostragem, desta forma é muito importante mantê-las em gelo durante toda a coleta e transporte até o freezer.
As amostras devem ser congeladas antes do processo de liofilização. Este processo pode ser realizado em freezer por no mínimo 12 horas a -18 ºC.
Liofilização
Liofilização é o processo de conservação de produtos biológicos. Envolve dois métodos confiáveis de conservação: o congelamento e a desidratação, através de alta pressão (vácuo) e baixa temperatura a - 50 °C.
A liofilização é um conjunto de procedimentos e não apenas a secagem, nela a secagem é a etapa derradeira e o material resultante apresenta todas as suas propriedades físicas, químicas e biológicas preservadas. O processo de liofilização se dará de acordo com as etapas abaixo
Antes de ligar o equipamento deve-se:
Certificar-se que o ar-condicionado do ambiente de liolfilização está ligado e manter na temperatura de 20°C.
Verificar se a água foi escoada da parte interna do condensador.
Utilizar um recipiente de plástico para drenar o fluído do equipamento (água).
Verificar se a válvula de dreno está fechada.
Verificar sempre o nível de óleo do equipamento.
Processo para ligar o liofilizador:
Ligar os interruptores GERAL e FRIO, e aguardar o equipamento atingir a temperatura entre 0 -59C (mais ou menos 15 minutos).
Retirar as placas do freezer removendo as tampas.
Inserir no equipamento as amostras já refrigeradas com no máximo 24 placas.
Ligar o interruptor VÁCUO e fechar as portas de vidro contra a vedação de borracha, até que o próprio vácuo seja capaz de mantê-las fechadas.
Com o vácuo ligado e a temperatura mantida há -59°C.
Preencher um Registro de operação do liofilizador via QRcode em um sistema de controle interno.
Aguardar o período mínimo de liofilização para a retirada do material, sendo de 15 horas à 18 horas.
Processo de desligar o liofilizador:
Desligar os interruptores FRIO e VÁCUO.
Abrir lentamente a válvula de dreno, aguardando em torno de 10 minutos para liberar toda pressão permitindo a entrada de ar e liberação das portas de vidros
Retirar as placas do equipamento e checar a qualidade da liofilização das mesmas, realizando o teste da pinça: as amostras devem estar secas e quebradiças.
Caso necessário, repetir o ciclo de liofilização até que as amostras estejam de acordo com o padrão do teste da pinça.
Desligar os interruptores FRIO e GERAL, no caso do desligamento do equipamento após a liofilização e fechar a válvula de dreno.
Se houver necessidade de realizar outro processo de liofilização aguardar o tempo mínimo de 30 minutos para recolocar novamente as novas placas, se finalizou realizar o descongelamento do condensador e abrir novamente a válvula de dreno para escoamento da água.
Observação Importante
Ao realizar a limpeza dos vidros NUNCA utilizar álcool, pois há possibilidades de trincar o vidro do equipamento,
Após o fechamento das placas com as tampas lacrar com filme plástico e colocar em caixas com plástico bolha e aguardar para envio.
Importante fazer registros da integridade e qualidade do processo como um todo.
Material Regulado
Em caso de coleta de material com status regulatório MATERIAL REGULADO, solicitar à Assuntos Regulatório de sua empresa, a autorização de transporte de material OGM, bem como comunicar à CIBio da movimentação do OGM e solicitar ao laboratório (destino) a devolutiva da autorização devidamente assinada e data do recebimento.
Envio
O envio será para o Laboratório em Brasília, antes desse processo solicitar a nota fiscal para setor responsável podendo o envio ser via área ou terrestre.
Dados da Agromarkers:
LAB SEED LABORATÓRIO BIOLOGIA MOLECULAR LTDA
54.368.157/0001-01
SETOR COMERCIAL SUL Q 2 BL C LT 92 S/N - SALA 104
EDIFÍCIO ARISTON
CEP 70.302-908
BRASÍLIA - DF